kontakt
Konfokálna mikroskopia
Laserový skenovací konfokálny fluorescenčný systém TCS SP2 AOBS (Leica Microsystems) s invertovaným mikroskopom DMIRE-2 (Leica)
Kontakt: RNDr. Alexandra Zahradníková ml., PhD.
Vybudované s podporou projektov HHMI-55000343, NIH FIRCA RO3 TW005543/2, LSHM-CT-2005-018833 a ITMS 26240120008
|
Konfokálny mikroskop Leica TCS SP2 je využívaný primárne na meranie lokálnych vápnikových signálov počas aktivácie uvoľňovania vápnika v xt móde, kedy jedna línia je skenovaná opakovane rýchlosťou až 2000 línií za sekundu (obrázok vľavo). Získaný obraz poskytuje údaje o priestore (x) a čase (t). Pomocou synchronizátora je konfokálny mikroskop spojený so zostavou patch-clamp aparatúry. Toto zapojenie nám umožňuje bunky kontrolovane stimulovať a ich prúdovú odpoveď a uvoľnenie vápnika zaznamenávať paralelne. Fluorescenčné indikátory vápnika kombinované s nefluorescenčnými chelátormi vápnika zobrazujú priestorovo oddelené lokálne udalosti aj v prípade, že k uvoľňovaniu vápnika dochádza v celom objeme bunky naraz. |
|
  |
|
Konfokálny mikroskop Leica TCS SP2 je samozrejme možné používať aj na meranie statických obrazov alebo pomalších javov v štandardnom xy móde. Fluorescenčné značky sa používajú na zobrazenie špecifických častí buniek, ako sú povrchová membrána (obrázok vpravo) a iné organely. Obrazy je možné snímať v sériách optických rezov umožňujúcich 3D rekonštrukciu, ako aj v časových sériách. Pri správnej kombinácii fluorescenčných indikátorov vápnika a bunkových štruktúr je možné korelovať záznamy z oboch typov zobrazení.
Zostava konfokálneho mikroskopu Leica TCS SP2:
|